Vic，9291耐药机制分析，仅供参考{2017.3.11}

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本帖最后由 vic 于 2017-3-11 08:02 编辑

家母，前年底，查出这病的
让我一个毫无医疗知识的文科男，
一头扎进枯燥的医疗数据分析了
面对，目前最大的课题，9291耐药后の路，
做一些资料整理
仅供参考，理性讨论

1.关于盲吃
首先，我说一下个人的建议
很多人，在群里常问到，一代药，耐药后怎么办
需不需要做基因检测？

我的回答，是否定，
并不是我自以为自以为自己有多懂，
只是，我认为，做不做结果都是一样的
且不论T790m这项检测的准确性，
单就国内基因检测的繁琐，时间的冗长，价格的高昂，外周血假阴率，取标的痛苦.....
我都觉得没有必要，（btw，年前带家母去了一次美国，那边T790m的检测一根试纸就解决）
还因为，无论做出的结果如何，为人子女的我们都不会放弃这个尝试的机会
所以，我一直坚持，一代耐药后，9291是可以盲吃的，
需要的，是盲吃前CT留底，和盲吃一个月后的CT评估对比

P.S 当然患者还是可以考虑一些大数据，
比如，一代药耐药的越晚9291有效的概率越高
具体参考值为，一代药使用时间大于6个月到无限大，越大使用92的概率越高

2.关于9291耐药的讨论
这个是，所以有egfr突变家属最大课题
9291好完美，副作用小，效果明显，入脑佳但是.....耐药了，怎么办

在我这一年多的爬文中，我大概总结一下目前用药的情况
9291联一代药，或者单一代药，联XL184（c-met），换Alk系列的用药
但是很少有使用2992的，在早期用药过程中大部分人使用过2992，不是副作用太大就是无效
但我接触到一个重庆的姐姐，她妈易瑞沙2年半（耐药后短暂使用过2992无效），9291一年，联一代药不果，
无奈下，重新启用2992，居然效果颇佳，已经5个月，还在稳定中
让我启发，这种方式，是否是一种新思维？？

于是，我找了一些资料
发现，其实，9291耐药后，Her2是一个非常高比例的耐药机制

下图为，中国肿瘤协会的大数据样本

下图为，个体靶向使用过程中多次基因检测的对比
14个月9291使用后，发生her2扩增突变

所以，9291耐药后，单2992其实也是一种机率不低的尝试

88F，C797s新药讨论

未完，待续，下周继续讨论其他选择

vic · 发表于 2017-3-11 07:25:15

本帖最后由 vic 于 2017-3-11 07:58 编辑

资料来源
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.201605011/full

表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR）
抑制剂作为非小细胞肺癌的治疗药物在临床上有着广泛应用。
但是由基因突变带来的耐药问题一直困扰着广大临床医生和肿瘤患者。
EGFR常见的耐药突变有L858R和T790M，以及近些年发现的C797S突变。

目前，在全球研发的EGFR抑制剂当中，
第三代抑制剂对T790M突变的EGFR能显示出较高的活性。
其中，代表性化合物有诺华公司的Nazartinib (EGF816)，
阿斯利康公司的Osimertinib (AZD9291)和Clovis公司的Rociletinib (CO-1686)等。

上述抑制剂的主要机制则是
通过迈克尔加成反应使得抑制剂和EFGR中ATP结合区域的Cys797形成共价键，
进而阻止ATP与EGFR的结合起到抑制作用。
当然，C797S突变则会阻止抑制剂与Cys797共价键的形成。
正因如此，针对L858R/T790M突变和L858R/T790M/C797S突变开发新型EGFR抑制剂就显得意义重大。

图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.

近日，德国多特蒙德工业大学的Daniel Rauh教授等
在Angew. Chem. Int. Ed.杂志上发表文章公开了他们发现的3个新型EGFR抑制剂。
老规矩，咱们还是先把活性分子放出来供大家欣赏。
（Insight into the Inhibition of Drug-Resistant Mutants of the Receptor
Tyrosine Kinase EGFR. Angew. Chem. Int. Ed., 2016, 55 10909-10912, DOI: 10.1002/anie.201605011）

图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.

作者在文中开门见山表示，
他们的目标是针对T790M突变的EGFR开发更有效的新型抑制剂。
大家可以脑补一下通讯作者接受采访被问到开发策略时的画面。

闲言少叙，书归正传。
作者简述了他们设计抑制剂的两个理念：
第一，优化亲电基团使Cys797烷基化得到共价不可逆抑制；
第二，针对靶点疏水特性，加入亲脂官能团来增强对T790M突变型EGFR的选择性，
并且避免和守门残基甲硫氨酸产生空间位阻作用。
在构建分子骨架上，作者选择了能和激酶铰链区结合（hinge-binding）的常见结构4-氨基吡唑并嘧啶作为母核；
选择共价激酶抑制剂中常见的丙烯酰胺片段作为迈克尔加成受体；
在母核的3位引入了常见的刚性亲脂基团。老规矩，咱们还是结构式说话。

正如作者在文中所说，这些分子很容易合成。
有多容易呢，作者都不稀得让合成路线在正文中露个脸。
好吧，我知道你们这些有机达人们在看到开场结构式的时候
已经把合成路线在脑子里写了好几遍啦。

好啦，我们还是接着说小目标吧。
这仨化合物一测活性，全部达到纳摩尔（nM）浓度级别的活性。
其中，化合物1c对L858R/T790M突变型的IC50甚至小于1 nM，
对L858R/T790M/C797S突变型的IC50达到了88 nM，这活性水平直逼上市药物AZD9291。
并且，作者通过动力学常数（Ki, kinact和kinact/Ki）的测定数进一步解释了各化合物活性差异的原因。
看来对作者来说，nM级别的抑制剂真是小目标啊。
同时，作者又在细胞水平上对这三个化合物进行了评价，
三个化合物对野生型EGFR和L858R/T790M突变型的抑制浓度相差30-40倍，
活性水平与EGF816和CO-1686相当，稍逊于AZD9291。
随后，作者验证了化合物1c对EGFR下游蛋白（Akt，MAPK和S6）磷酸化状态的影响进一步证明了其对EGFR的抑制作用。

图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.

随后，作者又评价了化合物1a和1c的细胞吸收行为，
结果表明这两个化合物具有良好的细胞渗透性和吸收性。
既然做激酶抑制剂，那么该走的套路还是要走的，比如广谱激酶抑制作用。
作者评价了化合物1a对100种激酶的生物活性。

结果表明，化合物1a对EGFR突变体
（EGFR-L861Q、L858R、T790M和L858R/T790M）
均表现出很强的抑制作用，对大部分激酶没有明显抑制作用。

图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.

最后，作者祭出了小分子与蛋白共晶这种大杀器，
报道了化合物1a和1b分别与T790M突变型EGFR的共晶结构，
可以发现1a或1b均与Cys797形成了共价键，
吡唑并嘧啶母核与铰链结合区存在氢键作用（图中虚线所示），
3位甲基吲哚基或萘基插入到守门残基M790和K745烷基侧链形成的疏水口袋中。

图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.

严谨的德国人为了证明他们设计分子的理念真的实现了，
居然还用质谱对抑制剂-蛋白复合物进行了分析，
证明了抑制剂与蛋白是1：1共价结合，结合位点是Cys797。
德国人真严谨啊。

同志们，我再在补充几句啊。
我反复阅读了原文总觉得这文章有个小遗憾。
化合物1c对L858R/T790M/C797S突变型的抑制作用好于1a和1b十倍百倍，
如果能得到1c与L858R/T790M/C797S突变型EGFR的共晶结果或生物质谱结果那就完美了。
声明一下，我可不是追求完美的处女座哦，也许德国学者们觉得还没有得到足够严谨的结果吧。
我总觉得过不了多久在其他高水平期刊上就能看到化合物1c的相关故事，
等我扒到以后再和大家分享，咱们拭目以待吧。

（本文由乐只君子供稿）